随着陆地油田进入开发的中后期，注水开发已经成为世界各大油田的主要开采方式，油田注水开发往往伴随大量的采油废水生成。采油废水中含有原油、固体悬浮物、细菌以及大量的无机盐，直接排放不仅造成环境污染，而且浪费大量的水资源。采油废水的资源化利用技术是目前国内外研究的热点，多种物理法、化学法和生物法已被单一或联合应用于采油废水处理。其中，浮选、粗粒化法等物理处理方式主要适用于乳化油和分散油;为提高处理效率，投加混凝剂、破乳剂等化学药剂的化学处理法不仅增加了废水处理成本，而且导致含油污泥的产生。

生物法一般是在自然或受控条件下，利用微生物将废水中的油类或其他有机物作为其生长代谢过程所需的底物进而转化或降解，从而彻底消除污染物，使废水达标排放。通过生物强化和生物刺激等手段，可以提高污染物的降解效率，是大规模、低成本处理含油废水的重要技术方法。一般来说，微生物对石油烃的摄取利用属于被动运输过程，烃类物质首先被乳化增溶后，通过菌体细胞膜才可被降解酶利用，这一过程往往需要表面活性剂类物质来介导。实际上，为有效提高原油采收率，通常在原油驱替水中添加表面活性剂，以降低油-水界面张力和改变岩石的润湿性，从而提高原油驱替效率。目前石油磺酸盐类化学合成表面活性剂作为添加剂加入驱替剂，已被证明可以有效提高采收率。但这类化学表面活性剂存在毒性强、难以降解等问题，将导致采油废水的处理难度增大。

生物表面活性剂对油-水界面性质的影响与化学表面活性剂相似，还具有低毒、可生物降解等优点。在国内外进行的原油驱替的先导性实验均已证明，糖脂类生物表面活性剂可作为化学表面活性剂的生态友好型替代品应用于石油采收领域。冯艳等利用铜绿假单胞菌发酵生产鼠李糖脂，所得发酵液进行物理模拟驱油，5%鼠李糖脂发酵液的生物复合体系采收率可达17.4%。

球拟假丝酵母菌(Starmerellabombicola)O-13-1是从长期污染的土壤中筛选的石油烃高效降解菌，该菌株能够有效降解原油并以原油为碳源合成槐糖脂类表面活性剂。因此，本研究围绕采油废水回注资源化利用的需要，通过实验室模拟实验，考察S.bombicola作为先锋菌株强化采油废水中石油烃降解的性能，探究该菌株利用采油废水中石油烃合成槐糖脂生物表面活性剂的潜力，为油田采出废水的高效资源化利用提供技术支撑。

1材料与方法

1.1试剂与仪器

实验试剂:葡萄糖、柠檬酸钠、酵母粉、KH2PO4、(NH4)2SO4、MgSO4·7H2O、乙酸乙酯为分析纯，购自国药集团化学试剂有限公司;正己烷为优级纯，购自Merck公司;二氯甲烷为优级纯，购自B&J公司;正构烷烃混合标准:C8—C40包含异构烷烃姥鲛烷和植烷，购自Accustandard公司;层析硅胶(100~200目)及硅胶层析板购自青岛海洋化工厂;原油采集自中国石化胜利油田有限公司利津区块;降解实验用水根据胜利油田利津区块采出水组成配置(见表1)，采出水中pH、盐度用多参数仪(Manta3.0，Eureka，美国)测定，K+、NO-3、Cl-、SO2-4、Na+等离子依据SY/T5523—2016《油田水分析方法》中给出的检测方法检测。

表1胜利油田利津区块采出水组成

实验菌株为球拟假丝酵母菌(Starmerellabombicola)O-13-1，由本课题组从胜利油田长期受到油污染的土壤中选育得到，并用冷冻管保存于-80℃冷冻冰箱中。活化时先用移液枪吸取10μL菌种于平板培养基中，再用十字划线法接种，培养箱中30℃恒温培养约48h后挑取长势较好的单菌落转接至斜面培养基上，4℃、YPD斜面上保存，每30天转移一次。

发酵培养基(g/L):KH2PO4 1.0，(NH4)2SO4 2.0，MgSO4·7H2O 4.0，葡萄糖1.0，柠檬酸钠5.0，酵母粉2.5。

1.2实验方法

1.2.1采油废水降解实验

为模拟采油废水中不同浓度油污染物对生物降解的影响，根据中国石化胜利油田有限公司孤岛采油厂的水驱采油过程中产生的采油废水中油污染物含量，配置油浓度0.3%、0.5%、0.8%三组培养实验。分别称取胜利油田原油0.3、0.5、0.8g装入盛有100 mL胜利油田利津区块采出水的500 mL锥形瓶中，温度为115℃下灭菌30 min，室温下冷却后在无菌环境下按体积比5%的接种量接入O-13-1菌株，于温度为30℃，转速为200r·min-1下恒温震荡，在此条件下培养10d，以不接种O-13-1菌株的相同油浓度下的油污废水作为对照，考察物理挥发等自然过程导致的油污染物损失。

1.2.2表面张力的测定

培养液的表面张力使用芬兰Kibron公司生产的Delta-8型全自动高通量91免费短视频污污污测定。该仪器基于其专有的微力传感技术，适用于微量样品的快速、平行测定。

测定时，首先使用超纯水对仪器进行校准。随后，使用多通道移液器将待测培养液样品精确移取至专用的24孔高通量样品板中，每孔样品体积为150μL。将样品板置于仪器测量平台后，于室温（约25°C）下进行自动测量。仪器通过监测独特探头与液面相互作用时的微力变化，经内置算法直接计算表面张力值。每个样品平行测定3次，结果取平均值。

该方法具有样品消耗量少、自动化程度高、重复性好的优点，显著提高了对本研究中大量样品的筛选效率。