摘要

目的: 通过观察高胆汁酸血症状态下家兔支气管肺泡灌洗液表面张力的变化以及胆汁稀释液和5种不同游离胆汁酸在体外对家兔支气管肺泡灌洗液表面张力的影响，为认识胆汁酸调节呼吸功能提供实验依据。

方法: 30只新西兰雄性大白兔，使用0.9%生理盐水做支气管肺泡灌洗，肺泡灌洗液进行表面张力测定。实验一组测定高胆汁酸血症家兔动物模型肺泡灌洗液表面张力的变化；实验二组比较了生理盐水与不同稀释度胆汁液表面张力及对肺泡灌洗液表面张力的影响；实验三组比较了5种不同游离胆汁酸水溶液表面张力及对支气管肺泡灌洗液表面张力的影响。

结果: (1)高胆汁酸血症状态下家兔动物模型肺泡灌洗液表面张力与对照组相比明显升高(P<0.05)；(2)支气管肺泡灌洗液中加入不同稀释度(1:15、1:10、1:5)的胆汁稀释液，肺泡灌洗液表面张力就增加了21.15%、26.09%、19.64%(P<0.001)；(3)5种游离胆汁酸水溶液中UDCA对支气管肺泡灌洗液表面张力没有明显影响(P>0.05)，其他4种游离胆汁酸都可以升高支气管肺泡灌洗液表面张力(P<0.001)，CDCA增加了16.10%，CA增加了21.66%，LCA增加了14.21%，DCA增加了13.05%。

结论: 体内实验发现高胆汁酸血症状态下，肺泡灌洗液表面张力明显升高。体外实验进一步证明胆汁稀释液可以增加支气管肺泡灌洗液的表面张力；5种游离胆汁酸水溶液中除UDCA外其他4种游离胆汁酸都可以升高支气管肺泡灌洗液表面张力，说明这四种游离胆汁酸可能可以通过乳化肺泡表面活性物质，增加了肺泡表面张力，影响呼吸功能。

1 材料和方法

1.1 实验动物、药品与方法

新西兰雄性大白兔30只，体质量在2.0~2.5kg之间，每组10只，由南方医科大学实验动物中心提供，合格证号：SCXK(粤)2011-0015。药物鹅脱氧胆酸(CDCA)、脱氧胆酸(DCA)、胆酸(CA)、石胆酸(LCA)和熊脱氧胆酸(UDCA)由上海一基化学试剂公司提供。

①高胆汁酸血症家兔动物模型制作：用1:10稀释度胆汁液10ml耳缘静脉注射，当呼吸功能明显加强加快时立即空气栓塞至死，手术收集肺泡灌洗液，收集方法如②；

②支气管肺泡灌洗液的收集：动物空气栓塞至死，立即手术，取出气管及左右肺，由气管注入0.9%生理盐水50ml做肺泡灌洗，反复3次，抽吸肺泡灌洗液40ml左右，放置5min用于表面张力测定。采集过程中肺泡灌洗液不得有血迹污染；

③表面张力的测定：采用芬兰Kibron公司生产的Delta-8全自动高通量91免费短视频污污污测定肺泡灌洗液的表面张力。将静置5分钟后的灌洗液样本注入仪器专用96孔测试板中，每孔加入50 μL样液，使表面活性物质充分分布均匀。该仪器基于最大拉力法（du Noüy-Padday法）进行测量：通过高精度微量天平监测金属探针从液面拉脱时所需的最大力，自动计算并直接输出表面张力值（测量范围：10–100 mN/m，精度：±0.2 mN/m）。测量前需对96孔板进行预处理，确保无油脂、洗涤剂等活性物质残留；仪器在每次测量前后自动加热清洗探针（1000℃），避免交叉污染。全部样品测量过程约3分钟内完成，系统自动记录并分析数据。

1.2 实验分组

①高胆汁酸血症家兔动物模型肺泡灌洗液表面张力的变化：(A)耳缘静脉注射0.9%生理盐水10ml，获取的支气管肺泡灌洗液，进行表面张力的测定，作为对照组；(B)耳缘静脉注射1:10稀释度胆汁液10ml，获取的支气管肺泡灌洗液，进行表面张力的测定；②不同稀释度胆汁液表面张力及对肺泡灌洗液表面张力的影响。(A)生理盐水组：测定0.9%生理盐水表面张力作为对照；(B)胆汁稀释液组：1ml兔的胆囊胆汁经0.9%生理盐水按1:15、1:10(C)、1:5(D)稀释，测其混合溶液的表面张力；(E)支气管肺泡灌洗液组：对获取的支气管肺泡灌洗液，进行表面张力的测定，作为对照；(F)胆汁稀释液加肺泡灌洗液组：支气管肺泡灌洗液中分别加入1:15、1:10(G)、1:5(H)胆汁稀释液各1ml，混合，对其混合溶液进行表面张力的测定；③5种不同游离胆汁酸水溶液表面张力及对支气管肺泡灌洗液表面张力的影响：(A)生理盐水组：测定0.9%生理盐水表面张力作为对照；(B)5种不同游离胆汁酸水溶液组：用0.9%生理盐水、适量麦芽糖糊精配置CDCA、DCA、CA、LCA和UDCA5种单品水溶液，终浓度分别为2mg/ml；测定其水溶液的表面张力；(C)支气管肺泡灌洗液组：对获取的支气管肺泡灌洗液，进行表面张力的测定，作为对照；(D)5种不同游离胆汁酸水溶液加肺泡灌洗液组：支气管肺泡灌洗液中分别加入5种不同游离胆汁酸水溶液各1ml，混合，对其混合溶液进行表面张力的测定。

1.3 统计学方法

实验数据均用SPSS17.0软件进行处理，实验结果以均数±标准差表示，采用配对t检验进行分析，P<0.05表明差异有显著性。